Equipo: 1
Daniela Castro Castillo
Anahi Flores Veronica
Sanjuanita Duran Vazquez
Cecilia Izaguirre Cerda
Johana Martinez Urbina
Jaqueline Martinez Leal
Jael Morales Lugas
Cristel Perez Vega
Profesor: Q.F.B. Jaime Hinojosa
¿Qué son las Enterobacterias?
Caracteristicas:
En la definición clásica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios básicos, adicional a la aparición de nuevos métodos taxonómicos para incluir a ciertos géneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:
- Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros pleomórficos.
- No son exigentes, son de fácil cultivo.
- Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.
- Son capaces de reducir nitrato en nitrito.
- Son anaeróbicos facultativos.
- Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aeróbicas.
- Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros no son móviles.
Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimioheterótrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y nitrógeno, generalmente sólo con D-glucosa, aunque algunas requieren aminoácidos y vitaminas. La temperatura óptima de crecimiento es de entre 22 °C y 37 °C.
Las diferencias entre los nombres de los diversos géneros provienen de criterios más precisos, como la fermentación de los diferentes azúcares, la producción o no de azufre, la presencia de enzimas metabólicas (β-galactosidasa, desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitaria pueden distinguirse entre sí por la presencia o ausencia de antígenos en su constitución celular, tales como en el lipopolisacárido (antígeno O), el antígeno flagelar (antígeno H) o el antígeno capsular (antígeno K).
Patología:
La presencia de Enterobacteriaceae dentro del organismo es anormal y determina la aparición de infecciones, cuya gravedad depende del punto de entrada. Introducidas por los alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse y atravesar la barrera de la mucosa gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratación. Ciertas especies provocan patologías específicas:
- La especie Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea.
- La especie Shigella dysenteriae es el agente responsable de la disentería bacilar.
- La especie Escherichia coli enterotóxica es responsable de la gastroenteritis infantil.
- La especie Yersinia pestis es responsable de la peste.
- La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en un hospital.
Las Enterobacteriaceae incluyen a organismos que resultan patógenos para el ser humano como la Escherichia coli o la Salmonella, especialmente importantes en la mortalidad infantil en países en desarrollo y patógenos para las plantas como Erwinia, en la mayor parte de los casos causando infecciones oportunistas. Todos los bacilos deEnterobacteriaceae son resistentes a antimicrobianos comunes, tales como la penicilina, la meticilina y la clindamicina, entre otros.
Métodos de identificación bacteriana:
es el ejercicio práctico en el que se ejercen las pruebas de identificación bacteriana. En la medicina general es común que llegue un paciente con síntomas de alguna infección bacteriana, el determinar un diagnóstico y poder interpretar qué bacteria causó la molestia al paciente es aventurado, pues hay muchas bacterias que causan las mismas enfermedades, por eso es conveniente realizar pruebas de identificación que son sumamente importantes para un buen diagnóstico de cualquier patología.
Cada género, inclusive especie, tiene diferentes reacciones cuando se les enfrentan diferentes reactivos, esto se hace a partir de un cultivo puro, ya la bacteria aislada, con estas pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué especie es esta bacteria. A estas pruebas se les ha como primarias, secundarias y Complementarias.
Algunas pruebas:
Para la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus características morfológicas, la reacción a la tinción de Gram, agrupación, propiedades, morfología colonial, reacciones metabólicas como producción de enzimas y reacciones de óxido-fermentación.
La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos:
- Tinción de Gram: Revela la forma de la bacteria, agrupación y grupo taxonómico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo.
- Tinción de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-Ácido resistentes (BAAR), son difíciles de cultivar, tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento, por eso es útil esta tinción de identificación primaria.
- Tinción de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros Bacillus y Clostridium.
- Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua, esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.
La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa, colocando 2 o 3 gotas al cultivo.
El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia.
Prueba de oxidasa: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa, muy útil en la identificación de bacterias Gram (-). La reacción de la oxidasa se debe a la presencia del sistema de citocromo-oxidasa, la cual activa citocromos reducidos por oxígeno molecular, por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones.
- Ácido de la Glucosa: La mayoría de las bacterias de interés médico usan la glucosa como fuente de carbono, como parte importante de su metabolismo. Se determina si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir de dicho carbohidrato. En un tubo con agua peptonada al 1% tapado, y un tubo de Durham, se inocula la bacteria por agitación teniendo cuidado de no mover el tubo de Durham e incubándolo 24 horas y 37°C se obtienen los siguientes resultados.
Si la bacteria usa la glucosa producirá ácido y/o gas, por lo tanto el agua peptonada se observará rosa, si produce gas, se observará una burbuja en el tubo de Durham.
- Prueba de O/F: para realizar esta prueba se usa el medio básico de Hugh y Leisfon con un pH de 7.1. Es un medio semisólido de color verde que se inocula por picadura, contiene carbohidratos como: glucosa, lactosa, sacarosa o maltosa al 10%. Como indicador de pH tiene Azul de bromotimol. Se usa en dos tubos, uno sin aceite y otro con acetie o vaselina sellándolo. Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura y se mantiene a 37°C por 24 horas.
- Prueba de Motilidad: Llamada también de la gota suspendida. Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo, los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados(monotricos, peritricos, etc.). La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada. Se coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio. Podremos observar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones.
- MEDIOS DE CULTIVO
- 1. Medios no selectivos: agar sangre
- 2. Medios selectivos-diferenciales: agar McConkey, agar EMB
- McConkey: colonias rosadas (fermentan lactosa) y colonias transparentes
- (no fermentan lactosa).
- Agar EMB: colonias azules (fermentan lactosa) y colonias transparentes
- (no fermentan lactosa).
- 3. Medios altamente selectivos: SS agar, agar XLD, agar Hektoen entérico.
- CULTIVO E IDENTIFICACIÓN
- PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN
- 1. Pruebas bioquímicas
- 2. Pruebas serológicas
- 3. Pruebas de biología molecular
CULTIVO E IDENTIFICACIÓN
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICAS
Prueba TSI (triple azúcar hierro)
Contiene lactosa 10 g, sacarosa 10 g y glucosa 1 g.
Resultados:
Superficie inclinada/fondo:
- alcalina/alcalina: BGNF ( Pseudomonas ).
- ácida/ácida: Bacterias fermentadoras de lactosa: E. coli, Klebsiella,
Citrobacter, Enterobacter, etc
- alcalina/ácida: Bacterias no fermentadoras de lactosa. Salmonella (H2S+), Shigella (H2S -), Yersinia.
TSI
- OTRAS PRUEBAS BIOQUÍMICAS
Producción de ureasa
Producción de indol
Utilización del citrato
Motilidad
Descarboxilación de lisina, arginina, ornitina
Producción de fenilalanina desaminasa
Producción de H 2 S
Prueba VP
Enterobacterias Representativas:
- E. coli
- Salmonella
- Shigella
- Yersinia enterocolitica
- Yersinia pseudotuberculosis
- Escherichia coli
- Klebsiella pneumoniae
- Proteus mirabilis
- Proteus vulgaris
- Enterobacter cloacae
- Citrobacter freundii
- Serratia marcescens
- Morganella morganii
- Providencia
